معرفی اجمالی تکنیک:

نام دستگاه: Real-Time PCR

مدل و برند دستگاه: ThermoFisher - StepOne real-time PCR

کشور سازنده: USA

مشخصات فنی دستگاه: این دستگاه دارای پلیت با 48 چاهک است. همچنین سیستم نوری آن براساس LED است که قابلیت جذب رنگ‌های فلورسنت FAM/SYBR Green ,VIC/JOE و ROX را دارد. به علاوه این دستگاه قابلیت تشخیص براساس تکنیک سایبر و پرایمر پروب را داراست.

توضیحات دستگاه:

در Real-Time PCR جهت بررسی بیان یک ژن، ابتدا با کمک آنزیم ترانس کریپتاز معکوس مولکول‌های RNA را به cDNA تبدیل می‌کنند. پس از پایداری مولکول مورد سنجش، وارد سیکل‌های Real-Time PCR شده و بیان مورد مطالعه قرار می‌گیرد. دستگاه Real-Time PCR از یک سیستم اپتیکی بهره برده که توسط آن میزان DNA هر نمونه محاسبه می‌گردد. زمانی که cDNA سنتز شد، پس از آماده سازی نمونه جهت ورود به سیکل‌های پلیمریزه شدن، به نمونه DNA رنگ SYBR Green اضافه می‌گردد. این محصول دارای ویژگی فلورسنتی می‌باشد و موجب رنگ شدن DNA می‌شود. در سیکل‌های پلیمریزاسیون به ازای ساخته شدن رشته‌های DNA جدید، رنگ سایبر گرین به رشته متصل می‌شود و دستگاه خوانش فلورسنتی را شروع می‌کند و برای هر نمونه یک گراف تکثیر ترسیم می‌کند. هر نقطه از گراف تکثیر نشان دهنده میزان اتصال SYBR Green به رشته DNA می‌باشد و در نهایت گراف که در نمایشگر متصل شده به Real-Time PCR به نمایش در آمده، به آستانه خود می‌رسد. این میزان نشان دهنده میزان DNA بیان شده در هر نمونه می‌باشد.

کاربرد دستگاه:

• بررسی بیان ژن به روش سایبرگرین
• شناسایی پاتوژن و تعیین ژنوتیپ به روش Taqman real-time PCR
• تعیین بار ویروس‌ها (viral load)